離心式快速脫鹽柱(5 kD)
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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DS0540
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離心式快速脫鹽柱(5 kD)
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20套/包
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● 產(chǎn)品介紹
離心式快速脫鹽柱根據(jù)排阻層析原理可以出色地完成蛋白脫鹽或緩沖液置換，適用于高于5 kD蛋白樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子去除。該產(chǎn)品回收率高，幾乎等體積回收蛋白樣品，在脫鹽的同時保持高回收率，樣品不會被稀釋。簡單使用離心操作，無需裝柱，代替比較耗時的傳統(tǒng)透析處理，以達(dá)到快速蛋白樣品脫鹽純化以及替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的。
脫鹽柱參數(shù)如下：
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排阻極限 Mr
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填料溶脹后體積
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處理樣品體積
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回收率
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工作pH
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5000
Da
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~0.6
ml
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100-200
μl
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70-90%
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2-13
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● 貯存、運(yùn)輸和效期：
常溫貯存（不能冷凍）；常溫運(yùn)輸；有效期兩年。
● 注意事項(xiàng)：
1.
操作方便，免去了繁瑣的透析過程，15-20分鐘內(nèi)即可完成樣品處理。
2.
本脫鹽柱建議一次性使用，不建議重復(fù)使用。
● 操作步驟
1. 取脫鹽柱，放入2
ml收集管中。
2.
加入400
μl滅菌水或樣品所需的緩沖液，常溫靜置5
min，1000×g（約3000
rpm）離心2
min。
注：離心力不要高于1000
g，過高的離心力會損傷填料，降低脫鹽效率。
3.
重復(fù)步驟2操作2次。
4. 樣品準(zhǔn)備：
樣品在上樣前建議離心取上清或用0.22
μm或0.45
μm濾膜過濾，減少雜質(zhì)影響。
5. 脫鹽處理：
脫鹽柱轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管中，脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理的蛋白樣品，靜置30秒，1000×g（約3000
rpm）離心2
min，收集回收樣品，保存?zhèn)溆谩?
注：為了確保從小體積樣品中獲得最大的蛋白回收效率，低于100 μl樣品上樣后要在樣品完全吸收后向填料中加入適當(dāng)體積的超純水或緩沖液壓層，使得總上樣體積為100 μl。
● 注意事項(xiàng)
1. 回收效果：樣品脫鹽后的回收率與樣品的濃度，以及上樣體積相關(guān)。樣品濃度越高，其回收率越高；同時在推薦的樣品上樣量范圍內(nèi)，上樣量越大，其回收率也會隨之升高。通常脫鹽后蛋白的回收率在70-90%。
2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi)，該脫鹽柱最多處理體積是200
μl樣品，過多會導(dǎo)致收集
管中液體浸沒到脫鹽柱。
3.
填料在高濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會有失水收縮現(xiàn)象，請勿將上述溶液進(jìn)行過柱；
4. 加樣時盡量均勻加至管中心位置；
5.
當(dāng)樣品濃度過低時（<0.01
mg/ml)，需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。
● 常見問題
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常見問題
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可能原因
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解決方法
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蛋白回收率偏低
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1、蛋白濃度過低（<0.01
mg/ml)
2、所置換的緩沖液成分或pH非最適緩沖液，產(chǎn)生了非特異性吸附
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1、現(xiàn)對蛋白液進(jìn)行適當(dāng)濃縮后脫鹽
2、更換適合的緩沖液，并充分平衡預(yù)裝柱2-3次
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蛋白回收后出現(xiàn)渾濁或沉淀
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1、緩沖液非最適緩沖液
2、緩沖液中的某些離子被除去了，導(dǎo)致蛋白質(zhì)等電點(diǎn)聚沉
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更換適合的緩沖液，并充分平衡預(yù)裝柱2-3次
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脫鹽不干凈
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鹽離子濃度過高（>0.5 M）
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根據(jù)鹽離子濃度適當(dāng)增加脫鹽次數(shù)或稀釋后脫鹽
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實(shí)驗(yàn)示例：
離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1（lane1-5）：細(xì)菌裂解物（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細(xì)菌裂解物上樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細(xì)菌裂解物經(jīng)過脫鹽柱處理后，上樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結(jié)論：脫鹽柱對裂解物所有蛋白都有較好的回收率（80%）
樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上樣量5μl
結(jié)論：脫鹽柱脫鹽處理效果明顯（含鹽BSA電泳泳道明顯變寬）
脫鹽后的BSA回收率可達(dá)90%
脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水，常溫靜置5min，1000 g
離心3min，重復(fù)2次；脫鹽柱放入新的1.5ml離心管中，加入0.1ml
細(xì)菌裂解物或0.2ml BSA溶液，靜置30S，1000g離心3min。
電泳：4-18% RealPAGE預(yù)制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白染色液染色30分鐘。