RealECL發(fā)光液 Ver.740574
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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EC2520-01
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RealECL發(fā)光液
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25 ml
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2-8℃
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EC2520-02
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RealECL發(fā)光液
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100 ml
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2-8℃
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EC2520-03
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RealECL發(fā)光液
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500 ml
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2-8℃
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
RealECL 是一種超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒，可與二抗上耦連的辣根過氧化物酶（HRP）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，發(fā)出熒光，從而可以通過用X光片壓片或其它適當(dāng)熒光成像設(shè)備檢測(cè)樣品。RealECL具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測(cè)出10-100 fg的微量抗原；發(fā)光迅速，熒光可使X感光膠片感光達(dá)1小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白檢測(cè)；另外高靈敏度可以大大節(jié)省寶貴的樣品以及非常昂貴的一抗和二抗的用量，降低實(shí)驗(yàn)成本。
● 貯存、運(yùn)輸及效期：
2-8℃貯存；有效期一年；濕冰運(yùn)輸。
● 注意事項(xiàng)：
1. RealECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，A液和B液相互污染后會(huì)導(dǎo)致A液或B液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。
2. 各溶液使用后，請(qǐng)蓋緊瓶蓋，以防失效。
3. 為獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，包括檢測(cè)樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇。
4. 由于疊氮鈉是HRP抑制劑，在緩沖液中應(yīng)避免使用疊氮鈉作為防腐劑；如果二抗中含有疊氮鈉，發(fā)光實(shí)驗(yàn)前要進(jìn)行5次TBST或PBST漂洗，每次10分鐘。
5. 在與膜發(fā)生接觸過程中，請(qǐng)佩戴手套且使用干凈鑷子等潔凈器材，避免蛋白污染產(chǎn)生高背景。
● 使用說明：
1. RealECL工作液的配制：等體積混合適量RealECL A液和B液，常溫放置備用。工作液宜在臨檢測(cè)前配制。
2. Western二抗孵育后，進(jìn)行數(shù)次洗滌，用平頭塑料鑷子將膜取出，用濾紙略吸去過多的液體(切勿接觸膜的蛋白面)，但不要使膜過度干燥，然后將膜平鋪于一潔凈保鮮膜上，避免產(chǎn)生氣泡。
注：某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)會(huì)淬滅熒光，請(qǐng)選擇ECL專用保鮮膜獲得更好的實(shí)驗(yàn)效果。
3. 根據(jù)膜的大小，按每平方厘米膜加0.125 ml RealECL工作液的比例，滴加RealECL工作液到膜上，確保使工作液均勻覆蓋在膜上，常溫放置1-2分鐘。
注：為達(dá)節(jié)約目的可將膜減小但勿降低發(fā)光液用量，確保發(fā)光液完全覆蓋于膜上。
4.將保鮮膜折起來完全包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。
5.可以使用ECL發(fā)光檢測(cè)儀器或暗室曝光。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，在黑暗中放入X感光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘，顯影定影觀察沖洗結(jié)果。如掌握不好曝光時(shí)間，可以在膜上放置3-4張X感光膠片，統(tǒng)一曝光3-5分鐘，顯影后選擇一張曝光最好的膠片。
應(yīng)用示例：
綠蘿總蛋白，RbcL一抗 1：2000，羊抗兔IgG-HRP 1：2000
a PVDF膜用抗體清除液處理后再用RealECL曝光。